6. phage titration protocol

-introduction

: 특정 용해물에서 plaque 형성 단위 PFU의 밀도를 정량화한다.

재고 현탁액에서 실행가능한 파지입자의 수를 결정한다.

 

-methode

a. 3mL soft LB agar(l)와 살모넬라(LT-2) 100 μL를 voltexing 한다.

b. a용액을 LB plate에 넣고 알코올램프 근처에서 굳힌다.

c. phage (p22) 원액을 희석한다. (10^-1~10^-8까지 진행한다.)

=1.5 mL tube에 90 μL LB와 10 μL phage를 넣고 up and down 2번 진행

d. plate labeling 한다.

e. 왼쪽부터 10^-6, 10^-7, 10^-8 10 μL 씩 접종한다.

f.  37도 인큐베이터에서 배양하고 plaque 관찰한다.

 

-Result

PFU ; 15*10^8*10^2 = 1.5*10^11 

 

-Discussion

만약 plate 전반적으로 plaque가 생겼다면 희석과정에서 phage가 잘못된 것을 알 수 있다.

또한, plaque가 전혀 생성되지 않았다면 희석 과정에서 error가 발생한 것을 알 수 있다.

실험 결과 사진에서 접종부위에 Plaque가 생성되었고, 희석할수록 줄어드는 모습을 보아 성공적인 실험임을 알 수 있다.