[정제공정] IMAC

일반적으로 IMAC이라 하면, 컴퓨터나 프로그래밍쪽 용어가 검색된다.

그러나 히스티틴 정제에 사용되는 방법으로 IMAC이 있다.

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IMAC은 금속이온이 수용액 상태에서 특정 아미노산에 결합하는 성질을 이용한 크로마토그래피 방법이다.

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-MECHANISM

고정된 금속이온(주로 Ni)과 단백질 표면에 존재하는 전자공여기 사이 결합 원리

사진 출처: 클릭

-사용되는 지지체(SUPPORTS)

1. Agarose: 가장 많이 사용됨

2. Cellulose: 호환성이 좋지만 내구성이 떨어짐

3. silica: 내구성이 좋지만 비특이적 결합이 잘 생김

 

-Ligand

1. IDA 

2. NTA

 

-Metal ions

Cu, Ni,Co 등 주로 2가 이온 사용

 

 

-사용되는 Buffer

1. IMAC buffer

-High salt (non-specific binding 결합 방지)

-Glycerol (up to 20% / 단백질끼리 소수성 상호작용 방지 = aggregation 방지)

-Binding buffer (목적 단백질과 히스티딘을 탈 양성자화 상태로 만든다.)

-protease inhibitor (목적단백질의 손상 예방)

-Reducing agents (적정 농도 중요!) / multimer를 monomer로 만들어주고, 히스티딘이 노출될 수 있게 해줌

 

 

2. Washing buffer

-Detergent (LPS 제거)

-low conc. imidazole 

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-장점

: 낮은 컨탐 / 넓은 pH 범위 / 금속이온을 쉽게 레진에서 분리 가능 / 여러개의 elution 과정