정제공정2 [정제공정] IMAC 일반적으로 IMAC이라 하면, 컴퓨터나 프로그래밍쪽 용어가 검색된다.그러나 히스티틴 정제에 사용되는 방법으로 IMAC이 있다.IMAC은 금속이온이 수용액 상태에서 특정 아미노산에 결합하는 성질을 이용한 크로마토그래피 방법이다.-MECHANISM고정된 금속이온(주로 Ni)과 단백질 표면에 존재하는 전자공여기 사이 결합 원리-사용되는 지지체(SUPPORTS)1. Agarose: 가장 많이 사용됨2. Cellulose: 호환성이 좋지만 내구성이 떨어짐3. silica: 내구성이 좋지만 비특이적 결합이 잘 생김 -Ligand1. IDA 2. NTA -Metal ionsCu, Ni,Co 등 주로 2가 이온 사용 -사용되는 Buffer1. IMAC buffer-High salt (non-specific bindi.. 2024. 11. 12. pull down assay 원리 오늘은 정제공정 과목에서 배운 pull down assay에 대해 소개하려 한다.먼저, pull down assay는 단백질-단백질 간의 interaction을 확인하는 실험 방법이다.다른 단백질 정제 시에 사용하는 방법이다-methode1. "bait"단백질에 GST-tag을 부착한다.2. tag에 특이적으로 결합하는 bead를 넣어 침전시킨다.(bead가 무겁기 때문에 가라앉는다.)3. wahing(tag에 결합 못한 bead 제거)4. "prey" 단백질을 넣어준다.5. 두 단백질이 상호작용한다.(결합)6. washing(결합 못한 단백질 제거)7. 전기영동을 통해 관찰한다. * 이때 sonication을 이용하여 박테리아를 lysate 시킨다.이후 elution 시킬때는 과량의 글루타치온을 넣어.. 2024. 11. 8. 이전 1 다음
