1. 세포 계대배양

-method

<부착형 세포>

1. 배지를 석션한다.

2. Pbs로 세포에 남아있는 FBS 성분을 washing 하고 석션한다. (2ml)

3. 10cm dish 기준 트립신 3ml 넣어주고 인큐베이터 37도 3분 처리한다.

4. 인큐베이터 돌린 디쉬에 트립신과 1:1 비율로 배지를 넣어준다. (배지 3ml)

5. 에이드를 이용해서 15ml 코니칼 튜브에 옮겨 담는다.

6. Pbs를 이용해서 디쉬에 남아있는 세포들을 washing하고 튜브에 옮긴다.

7.  원심분리 1060rpm, 3M, 4도 설정

8. 팔렛만 남겨두고 상등액은 석션한다.  

9. 배지 1ml로 팔렛을 잘 풀어준다. (Up & down)

10. Dish에 배지 7ml를 넣고 팔렛 250ul 넣어준다. (1:4 계대배양 기준)

11. 잘 섞어주기 위해 디쉬를 8자로 흔든다.  

12. 현미경으로 관찰한다. 

*dish 라벨링

: 세포 이름, 실험 날짜, 세포 나이(ex. p. 21), 실험자 이름

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계대배양 후 하루 지난 모습

계대배양 후 4일 지난 모습