5. phage transduction

-introduction

: phage는 카나마이신(항생제) 저항성을 갖고 있고 살모넬라는 항생제 내성이 없다.

따라서 Km배지에는 살모넬라는 자랄 수 없고 phage가 transduction 된 살모넬라만 성장할 수 있다. 

 

 

-방법

a. 37도 O/N배양한 살모넬라 전 배양액을 사용한다.

b. tube에 LT-2(살모넬라) 200 ml와 phage(50 μL)를 넣고 tapping 한다.

c. 상온에 10분 방치(=rt 10분)

d. 카나마이신 배지에 1000 μL LT-2 spreading 한다. (CTL)

e. LB배지에 1000 μL LT-2 spreading 한다. (CTL)

f. 카나마이신 배지에 b용액을 100 μL spreading한다.

g. spreading전에 배지에 labeling 한다. (카나마이신 배지는 plate옆에 검은 선 표시)

h. 접종한 배지는 37도 o/n 인큐베이터에 처리한다.

 

-result

 

-Discussion

: Km CTL에서는 균이 자라면 안 되는데, 성장했다.

이는 배지가 잘못되었거나 살모넬라 균이 잘못되었거나 

스프레딩 과정에서 오염이 발생하였을 경우가 있다.