분자생물학실험4 6. phage titration protocol -introduction : 특정 용해물에서 plaque 형성 단위 PFU의 밀도를 정량화한다. 재고 현탁액에서 실행가능한 파지입자의 수를 결정한다. -methode a. 3mL soft LB agar(l)와 살모넬라(LT-2) 100 μL를 voltexing 한다. b. a용액을 LB plate에 넣고 알코올램프 근처에서 굳힌다. c. phage (p22) 원액을 희석한다. (10^-1~10^-8까지 진행한다.) =1.5 mL tube에 90 μL LB와 10 μL phage를 넣고 up and down 2번 진행 d. plate labeling 한다. e. 왼쪽부터 10^-6, 10^-7, 10^-8 10 μL 씩 접종한다. f. 37도 인큐베이터에서 배양하고 plaque 관찰한다. -Result P.. 2023. 11. 21. 3. 무균 조작법(선상도말평판배양법) -introduction : 보관된 미생물 시료로부터 매번 단일 집락을 구성하도록 접종하여 배양하는 것은 해당 세포의 고유한 특성 보존에 매우 중요하다. 고체배지상에서 단일 클론이 나타나도록 Loop를 이용하여 접종한다. - 실험 방법 1. 70% 에탄올을 뿌리고 종이 타월로 닦아 실험 work zone을 소독한다. 2. 세균 접종한 LB배지에 유성펜을 사용하여 균주명과 날짜를 표시한다. (labeling) 3. 열처리를 하여 멸균된 접종 Loop를 충분히 식히고 LB에서 하루 배양된 E.coli를 긁어낸다. 4. 배지의 한 부분에 세균을 조심히 줄 긋듯이 지나간다. (한번) 5. 접종 Loop를 다시 열처리 하고 식힌 다음 한번 접종한 줄에서 끌어다가 줄 긋기를 계속한다. (두 번) 6. 동일한 벙법으.. 2023. 10. 31. 2. LB배지 제조 -introduction LB배지의 조성 : tryptone(탄소원, 질소원으로 사용) yeast extract( 영양소, 유기화합물 공급) NaCl( 삼투압 조절) agar(고체 배지로 만들어준다)-실험방법 1. 구성 성분 g 계산하기2. 전자저울을 이용하여 계산한 성분들을 Erlenmeyer flask에 넣는다. 3. 150 mL 증류수를 Erlenmeyer flask에 넣고 잘 섞는다, (마그네틱 바 이용) 4. autoclave 하고 50-60°C 항온수조에 넣어 온도를 낮춘다. 5. petri dish에 분주한다. 6. 굳으면 뚜껑이 바닥으로 향하도록 뒤집어 놓는다. 7. 완성한 배지는 냉장 보관한다.-discussion 페트리디쉬 뚜껑이 아닌 바닥에 이름을 적는 이유는 실험 중 타 실험자와 뚜.. 2023. 9. 22. 1. 멸균법 실험 방법 1. 대장균 배양액과 고온고압 멸균한 동일 배양액을 10 microliter씩 취하여 LB배지에 떨어뜨린다. 2. 대장균 배양액을 LB brother를 이용하여 1/100으로 희석하고, 여기에 5mL 취하여 멸균된 시험관에 여과 멸균한다. 희석한 배양액과 여과멸균액 각각 10 microliter를 취하여 LB배지에 배양한다. 3. 접종액이 건조되면 뒤집어서 37도 배양기에 넣고, 하룻밤 배양하여 증균 상태를 확인한다. Result Discussion : 이번 실험은 autoclave와 filter를 통한 멸균법에 대한 실험이다. 실험은 E.coli 배양액과 autoclave 한 동일 배양액을 LB 액체 배지를 이용해 1/100배 희석하여 진행하였다. LB부분에는 LB 액체 배지, E.coli에.. 2023. 9. 18. 이전 1 다음
