1. 멸균법

실험 방법

1. 대장균 배양액과 고온고압 멸균한 동일 배양액을 10 microliter씩 취하여 LB배지에 떨어뜨린다.
2. 대장균 배양액을 LB brother를 이용하여 1/100으로 희석하고, 여기에 5mL 취하여 멸균된 시험관에 여과 멸균한다.

희석한 배양액과 여과멸균액 각각 10 microliter를 취하여 LB배지에 배양한다. 

3. 접종액이 건조되면 뒤집어서 37도 배양기에 넣고, 하룻밤 배양하여 증균 상태를 확인한다. 

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Result

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Discussion
: 이번 실험은 autoclave와 filter를 통한 멸균법에 대한 실험이다.
실험은 E.coli 배양액과 autoclave 한 동일 배양액을 LB 액체 배지를 이용해 1/100배 희석하여 진행하였다.
LB부분에는 LB 액체 배지, E.coli에는 대장균 배양액, auto에는 autoclave 처리 한 배양액, filter에는 필터처리한 배양액 희석액을 접종하였으므로 이론상 E.coli label부분에만 대장균이 성장해야한다. 그러나 실험결과에서 4부분 모두 E.coli가 growth했다.
그 이유로 피펫팅 실수가 있다. 배지에 피펫 투스텝을 이용하여 접종하는 과정에서 기포가 만들어졌고, 이 기포로 인해 주변 배지로 E.coli 배양액이 튀었기 때문이다. 배지에 피펫을 이용해 접종할 경우 천천히 접종하여 기포가 덜 생기는 방향으로 실험을 진행해야 한다.
실험에 DH5-α cell을 사용하였는데, 이 셀은 형질 전환 효율을 극대화 하기 위해 제작된 대장균 세포이며, 수용성 상태로 종종 원하는 플라스미드를 삽입하기 위해 염화칼슘 형질 전환과 함께 사용된다.