3. 무균 조작법(선상도말평판배양법)

-introduction

: 보관된 미생물 시료로부터 매번 단일 집락을 구성하도록 접종하여 배양하는 것은 해당 세포의 고유한 특성 보존에 매우 중요하다.

고체배지상에서 단일 클론이 나타나도록 Loop를 이용하여 접종한다.

 

- 실험 방법

1. 70% 에탄올을 뿌리고 종이 타월로 닦아 실험 work zone을 소독한다.

2. 세균 접종한 LB배지에 유성펜을 사용하여 균주명과 날짜를 표시한다. (labeling)

3. 열처리를 하여 멸균된 접종 Loop를 충분히 식히고 LB에서 하루 배양된 E.coli를 긁어낸다.

4. 배지의 한 부분에 세균을 조심히 줄 긋듯이 지나간다. (한번)

5. 접종 Loop를 다시 열처리 하고 식힌 다음 한번 접종한 줄에서 끌어다가 줄 긋기를 계속한다. (두 번)

6. 동일한 벙법으로 한번 더 접종한다. (세 번)

7. 37도 배양기에서 하룻밤 (o/n) 배양하고 단일 집락 여부를 관찰한다.

 

 

-Result

 

-Discussion

: 실험의 가장 중요한 포인트는 멸균상태, 환경이므로 불 옆에서 실험을 진행한다.

또한 실험 work zone을 70% 에탄올로 반드시 소독한다.

성장한 E.coil 단일 집락이 적은데, 배양과정에서 각 단계에서 직전단계의 E.coil를 너무 조금 가져왔기 때문이다.