살모넬라2 6. phage titration protocol -introduction : 특정 용해물에서 plaque 형성 단위 PFU의 밀도를 정량화한다. 재고 현탁액에서 실행가능한 파지입자의 수를 결정한다. -methode a. 3mL soft LB agar(l)와 살모넬라(LT-2) 100 μL를 voltexing 한다. b. a용액을 LB plate에 넣고 알코올램프 근처에서 굳힌다. c. phage (p22) 원액을 희석한다. (10^-1~10^-8까지 진행한다.) =1.5 mL tube에 90 μL LB와 10 μL phage를 넣고 up and down 2번 진행 d. plate labeling 한다. e. 왼쪽부터 10^-6, 10^-7, 10^-8 10 μL 씩 접종한다. f. 37도 인큐베이터에서 배양하고 plaque 관찰한다. -Result P.. 2023. 11. 21. 5. phage transduction -introduction : phage는 카나마이신(항생제) 저항성을 갖고 있고 살모넬라는 항생제 내성이 없다. 따라서 Km배지에는 살모넬라는 자랄 수 없고 phage가 transduction 된 살모넬라만 성장할 수 있다. -방법 a. 37도 O/N배양한 살모넬라 전 배양액을 사용한다. b. tube에 LT-2(살모넬라) 200 ml와 phage(50 μL)를 넣고 tapping 한다. c. 상온에 10분 방치(=rt 10분) d. 카나마이신 배지에 1000 μL LT-2 spreading 한다. (CTL) e. LB배지에 1000 μL LT-2 spreading 한다. (CTL) f. 카나마이신 배지에 b용액을 100 μL spreading한다. g. spreading전에 배지에 labeling 한다.. 2023. 10. 31. 이전 1 다음
