전공 활동/실험이론6 MTT assay 오늘은 세포 실험에서 추출물의 세포독성을 확인하는 방법인MTT assay를 소개하고자 한다.-목적추출물이나 화합물이 세포독성을 갖고있는지 확인하기 위해invitro에서 실험하는 방법이다.-method1. 세포 배양10^4개만큼 96well plate에 seeding 한다.37도 OE 처리한다. 2. 추출물 처리추출물을 농도에 맞게 희석하고 시간에 맞게 처리한다. 3. MTT시약처리basal medium과 MTT 시약을 96well에 처리하고 3시간 incubation 처리한다.MTT 용매 150uL를 96well에 처리한다.오비탈 세이커에 15분 처리한다.흡광도를 측정한다. 2024. 11. 24. 세포 배양 시 passage 측정 오늘 새롭게 알게 된 지식 세포를 1년을 키웠지만...처음 알게되어 기록한다.먼저, 세포 passage는 내가 몇번의 배양을 했는지 측정하는 간단한 방법이다. 암세포같은 불멸화 세포들은 계대배양 후 셀을 얼릴때 Passage를 올리지 않는다고 한다. Ex) p.3 cell->계대배양-> 얼릴때 p.3으로 기록 그러나 Hdlec같은 한계가 있는 세포(최대 p.10)들은 계대 시 passage를 하나씩 올린다 얼린 셀을 풀때는 passage를 올리지 않고 바이알에 적힌 그대로 기록한다 2024. 11. 15. [정제공정] IMAC 일반적으로 IMAC이라 하면, 컴퓨터나 프로그래밍쪽 용어가 검색된다.그러나 히스티틴 정제에 사용되는 방법으로 IMAC이 있다.IMAC은 금속이온이 수용액 상태에서 특정 아미노산에 결합하는 성질을 이용한 크로마토그래피 방법이다.-MECHANISM고정된 금속이온(주로 Ni)과 단백질 표면에 존재하는 전자공여기 사이 결합 원리-사용되는 지지체(SUPPORTS)1. Agarose: 가장 많이 사용됨2. Cellulose: 호환성이 좋지만 내구성이 떨어짐3. silica: 내구성이 좋지만 비특이적 결합이 잘 생김 -Ligand1. IDA 2. NTA -Metal ionsCu, Ni,Co 등 주로 2가 이온 사용 -사용되는 Buffer1. IMAC buffer-High salt (non-specific bindi.. 2024. 11. 12. sprouting assay 실험 기록 주로 암 치료제의 효능을 평가할 때, 사용하는 실험 방법으로신생 혈관의 정량이나 성장을 확인할 수 있다. 림프내피세포를 이용하여 실험한다. 구체적인 실험방법은 키우는 세포와 목표하는 결과에 따라 다르겠지만내가 해본 실험 방법을 기록하고자 한다.-method*실험 전 처리실험 시작 전 mc bead를 수화시켜놓아야 한다.1. mc bead powder를 정량하고 pbs를 농도에 맞게 넣고 4시간 수화시킨다.2. Autoclave 3. 10분씩 2번 침전시켜 상등액과 mc bead를 분리하고 상등액을 제거한다.4. EBM(LEC 배지)를 농도에 맞게 넣고 냉장보관한다.5. 실험 시작 전에 30분간 rt에 둔다. *Day 1(cell 용량, mc 용량, EBM용량 미리 결정)1. 비점착식 24well에 LEC.. 2024. 11. 10. real-time PCR primer 디자인 (2) 저번 글에 이어서 이번에는 다른 바이러스를 가지고한번 더 디자인을 해보려고 한다.2024.03.17 - [분자생물학] - PCR primer design하기 PCR primer design하기PCR을 배우게 되면 가장 먼저 하는게 내가 원하는 바이러스에 대한 primer를 디자인하는 것이다. 손으로 직접 하는 방법도 있지만 프로그램을 이용하면 훨씬 간단하게 알아낼 수 있다. 오늘은 그gardening-my-life.tistory.com자세한 설명과 구체적인 방법은 위에 글 참고이번에 선택한 바이러스는 " Simian virus 40"이다.NCBI에 Simian virus 40 complete genome 검색해서NCBI reference number 확인하고 ( NC_001669.1)CDS를 확인해주려고.. 2024. 3. 20. PCR primer design하기 PCR을 배우게 되면 가장 먼저 하는게 내가 원하는 바이러스에 대한 primer를 디자인하는 것이다. 손으로 직접 하는 방법도 있지만 프로그램을 이용하면훨씬 간단하게 알아낼 수 있다. 오늘은 그 방법을 소개하고자 한다.1.먼저, target 바이러스를 NCBI에 들어가서 검색해준다.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ National Center for Biotechnology Information www.ncbi.nlm.nih.gov검색창에 내가 원하는 바이러스 이름+complete genome으로 검색해준다. EX)예를 들어 porcine parvovirus 바이러스에 대해 pcr을 하자그러면 검색에 porcine parvovirus complete genome을 검색한다.이런 화면.. 2024. 3. 17. 이전 1 다음
