세포키우기3 세포 배양 시 passage 측정 오늘 새롭게 알게 된 지식 세포를 1년을 키웠지만...처음 알게되어 기록한다.먼저, 세포 passage는 내가 몇번의 배양을 했는지 측정하는 간단한 방법이다. 암세포같은 불멸화 세포들은 계대배양 후 셀을 얼릴때 Passage를 올리지 않는다고 한다. Ex) p.3 cell->계대배양-> 얼릴때 p.3으로 기록 그러나 Hdlec같은 한계가 있는 세포(최대 p.10)들은 계대 시 passage를 하나씩 올린다 얼린 셀을 풀때는 passage를 올리지 않고 바이알에 적힌 그대로 기록한다 2024. 11. 15. 2. 배지 만들기 (D10 배지) -배지 구성: DMEM, FBS, P/s(DMEM, FBS: 세포에게 영양 공급 / p/s: 배지 오염 예방) -방법1. 50ml 코니칼 튜브에 DMEM 45ml 넣어준다. 2. 5ml FBS를 넣어주고 잘 섞어준다. 3. P/s 500ul 넣어주고 잘 섞어준다. (걸쭉하므로 잘 섞어야 한다.)4. 새로운 코니칼 튜브에 라벨링 한다. (배지 이름, 날짜, 만든 사람)5. 시린지 필터를 새로운 튜브에 얹고 주사기를 꽂는다.6. 주사기에 만든 배지를 넣고 내려준다. (중간에 멈추면 공기가 유입돼서 나오지 않으므로 한 번에 내려야 한다.)7. 뚜껑을 꽉 닫고 파라필름으로 잘 감싸준다. 모든 실험은 무균조작대에서 진행한다. 2023. 12. 17. 1. 세포 계대배양 -method1. 배지를 석션한다.2. Pbs로 세포에 남아있는 FBS 성분을 washing 하고 석션한다. (2ml)3. 10cm dish 기준 트립신 3ml 넣어주고 인큐베이터 37도 3분 처리한다.4. 인큐베이터 돌린 디쉬에 트립신과 1:1 비율로 배지를 넣어준다. (배지 3ml)5. 에이드를 이용해서 15ml 코니칼 튜브에 옮겨 담는다.6. Pbs를 이용해서 디쉬에 남아있는 세포들을 washing하고 튜브에 옮긴다.7. 원심분리 1060rpm, 3M, 4도 설정8. 팔렛만 남겨두고 상등액은 석션한다. 9. 배지 1ml로 팔렛을 잘 풀어준다. (Up & down)10. Dish에 배지 7ml를 넣고 팔렛 250ul 넣어준다. (1:4 계대배양 기준)11. 잘 섞어주기 위해 디쉬를 8자로 흔든다... 2023. 12. 17. 이전 1 다음
