cloning1 Cloning (1)-전체 과정 -방법 A. EGFR의 mRNA를 cDNA로 역전사 효소를 이용하여 역전사 시킨다. (RNA가 변성이 잘되기 때문에 비교적 안정한 DNA를 사용한다.) B. 역전사 시킨 cDNA를 증폭하기 위해 PCR을 진행한다. B-1) DNA이중가닥을 풀기 위해 95도의 열을 가해 변성시킨다. B-2) 약간 냉각시킨 후 45-60도에서 프라이머를 부착한다. B-3) 72도에서 Taq중합효소가 주형가닥에 상보적인 서열로 확장하고 DNA를 형성한다. C. 전기영동을 통해 PCR이 잘 되었나 확인한다. D. 제한효소를 이용해 vector에 증폭한 DNA를 넣어준다. D-1) 단백질들은 우리가 원하는 제한효소를 갖고 있지 않아서 프라이머 양끝에 제한효소 인식 부위를 넣어주고 PCR 처리한다. 따라서 양 끝에 제한효소 처리가.. 2023. 12. 17. 이전 1 다음