published: 2022/ 02/ 17, nature
링크: https://doi.org/10.1038/s41467-022-28618-9
＊정의
HCC: 간암세포종
HIF: 저산소 유발 인자
HIF-1: EHD2 전사 활성화 -> 대식세포 활성화
EHD2: 막 주름 단백질인 EH 도메인 함유 단백질 2
EHD: 원형질막의 지질과 상호 작용하고 원형질막 곡률을 유지하여 소포 형성을 위한 막 분열 유도, 세포내 과정 제어하는 다이나민 관련 ATPase이다.
Tf: 트랜스퍼린
MP저해제: EIPA, IPA-3, BafA1, CQ
figure.1
hypoxia가 HCC cell에 어떤 영향을 주는지 알아보기 위한 실험으로
그림 a,b를 통해 덱스트란 흡수 및 MP(macropinocytosis)가 hypoxia에서 감소함을 확인함
EIPA(MP억제제)를 통해 MP가 감소됨 또한 확인가능
fig.2
HCC cell인 MHCC97L에 디곡신(HIF-1 억제제) 이식
-> 종양 성장과 크기 모두 감소, MP또한 감소함
IPA-3 이식(HDTVi)
-> 종양 성장과 MP억제
＊HDTVi
=쥐 꼬리에 주사 접종해서 gene 이식하는 방식
Tp53 KO, c-MYC OE는 체내 HCC환경과 비슷한 환경 만들기 위한 조치
(Tp53=종양 억제, c-MYC = 종양 성장 help)
figure.5
안정적인 동위원소 교환 및 동위원고 추적 실험의 흐름
MP일 경우 동위원소 표지 비율 감소
MP가 아닐 경우, 동위원소 표지 비율 유지
hypoxia 상황에서 총 아미노산에 대한 동위원소 표지 아미노산 비율이 감소
HIF-1a KO, EHD2 KO에서 표지 아미노산 비율이 회복됨을 확인 가능함
-> MP된 단백질이 세포 내 아미노산 pool에 대사통합됨
figure.6
HCC에서 EHD2의 역할을 설명하기 위한 실험
EHD2 KO된 종양이 크기도 감소하고 MP가 감소한 것을 확인
종양의 폐 전이 부분도 감소함을 확인함
HDTVi 방법으로 실행한 실험
종양의 크기, 성장 모두 감소함, MP 부분도 감소함을 확인 가능
-> EHD2가 생체 내에서 MP를 유도하고 HCC 성장을 촉진함
figure.7
변이 EHD2를 통해 EHD2 매개 MP가 일반적인 현상인지 알아보기 위한 실험
EHD2 transgenic으로 실험을 실시
돌연변이 EHD2도 마찬가지로 종양의 크기와 성장, MP 모두 감소함을 알 수 있음
논문의 전반적 내용을 요약하는 그림
1) EHD2가 액틴 필라멘트와 상호작용하여 HCC cell에서 막 러플을 진행
2) hypoxia 상태로 인해 MP가 세포 외 단백질 흡수
3) 세포 외 단백질 분해 -> 아미노산 pool에 흡수되어 HCC 성장 지원
<디스커션>
1) 저산소증을 가진 다른 고형암에 적용될 수 있는 HCC에 대한 통찰력 제공
2) MP의 다양한 단계를 대상으로 하는 억제제가 현재까지 효과적인 분자 표적이 없는 HCC에 대한
새로운 치료 방법이 될 수 있음을 시사
3) 알부민 운반체를 통해 제거된 지질이 지질의 공급원으로 사용될 수 있는지의 여부 연구가 필요하다.
＊ 공부할 내옹
: ChIP 분석법, 엔도사이토시스(세포내 이입), BSA분석
