4. 미생물 생장량 조사

-introduction

: 배양시간별로 증식하는 세균의 수를 조사하고, 이를 이용하여 specific growth rate를 구하고

이를 이용하여 대량 배양에서 시간별로 증식하는 세균의 수를 예측한다.

 

-방법

a. 3 ml LB에  E.coil를 섞고 37도 O/N 처리한다.(shaking 인큐베이터)

b. E.coil가 배양이 된다면 뿌옇게 변한다.

c. a용액을 1/100 희석해서 (1.5ml tube 6개 만듦) shaking 인큐베이터 처리한다.

c-1. 30분 배양, 1시간 배양, 2시간 배양, 4시간 배양, 8시간 배양, 배양 X로 나뉜다.

d. plate에 배양한다. (희석액 10^-3 ~10^-8 사용) 

f. 흡광도를 측정한다.

 

 -CFU값을 구하기

T0: 32*10^3*10*2 = 3.2 x 10^6

=(세포수 (32개) * 희석배수 * 1/100희석진행)

T0.5: 48*10^3*10^2 = 4.8 x 10^6

T1: 1.2 x 10^7

T2: 2.8 x 10^7 

 

-> doubling time은 T1에서 T2로 될 때 생긴다.

doubling time은 0.8이므로, 2배가 되는 데 걸리는 시간은 48분이다. 

 

-result

배양시간	600nm 흡광도	colony forming unit	CFU/ml
T0	0.001	32개 (10^-3 희석)	3.2 x10^6
T0.5	0.005	48개 (10^-3)	4.8 x 10^6
T1	0.009	12개 (10^-4)	1.2 x 10^7
T2	0.039	28개 (10^-4)	2.8 x 10^7
T4	0.155	25개 (10^-5)	2.5 x 10^8
T8	0.380	39개 (10^-5)	3.9 x 10^8