실험방법3 [정제공정] IMAC 일반적으로 IMAC이라 하면, 컴퓨터나 프로그래밍쪽 용어가 검색된다.그러나 히스티틴 정제에 사용되는 방법으로 IMAC이 있다.IMAC은 금속이온이 수용액 상태에서 특정 아미노산에 결합하는 성질을 이용한 크로마토그래피 방법이다.-MECHANISM고정된 금속이온(주로 Ni)과 단백질 표면에 존재하는 전자공여기 사이 결합 원리-사용되는 지지체(SUPPORTS)1. Agarose: 가장 많이 사용됨2. Cellulose: 호환성이 좋지만 내구성이 떨어짐3. silica: 내구성이 좋지만 비특이적 결합이 잘 생김 -Ligand1. IDA 2. NTA -Metal ionsCu, Ni,Co 등 주로 2가 이온 사용 -사용되는 Buffer1. IMAC buffer-High salt (non-specific bindi.. 2024. 11. 12. sprouting assay 실험 기록 주로 암 치료제의 효능을 평가할 때, 사용하는 실험 방법으로신생 혈관의 정량이나 성장을 확인할 수 있다. 림프내피세포를 이용하여 실험한다. 구체적인 실험방법은 키우는 세포와 목표하는 결과에 따라 다르겠지만내가 해본 실험 방법을 기록하고자 한다.-method*실험 전 처리실험 시작 전 mc bead를 수화시켜놓아야 한다.1. mc bead powder를 정량하고 pbs를 농도에 맞게 넣고 4시간 수화시킨다.2. Autoclave 3. 10분씩 2번 침전시켜 상등액과 mc bead를 분리하고 상등액을 제거한다.4. EBM(LEC 배지)를 농도에 맞게 넣고 냉장보관한다.5. 실험 시작 전에 30분간 rt에 둔다. *Day 1(cell 용량, mc 용량, EBM용량 미리 결정)1. 비점착식 24well에 LEC.. 2024. 11. 10. pull down assay 원리 오늘은 정제공정 과목에서 배운 pull down assay에 대해 소개하려 한다.먼저, pull down assay는 단백질-단백질 간의 interaction을 확인하는 실험 방법이다.다른 단백질 정제 시에 사용하는 방법이다-methode1. "bait"단백질에 GST-tag을 부착한다.2. tag에 특이적으로 결합하는 bead를 넣어 침전시킨다.(bead가 무겁기 때문에 가라앉는다.)3. wahing(tag에 결합 못한 bead 제거)4. "prey" 단백질을 넣어준다.5. 두 단백질이 상호작용한다.(결합)6. washing(결합 못한 단백질 제거)7. 전기영동을 통해 관찰한다. * 이때 sonication을 이용하여 박테리아를 lysate 시킨다.이후 elution 시킬때는 과량의 글루타치온을 넣어.. 2024. 11. 8. 이전 1 다음
