PCR5 Bovine adenovirus 정량 검출을 위한 Taqman Probe Realtime PCR date.24.05.14 1. introductionBovine adenovirus-가장 흔하게 감염되는 바이러스 중 하나-소 유래 물질을 원료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제 등에서 BADV 안정성 확보를 위해원료물질, 제조공정, 완제품에서 BADV를 정량적으로 검출하고 제조공정에서 BADV 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능하다. Taqman probe-5'말단은 형광물질, 3'말단은 형광억제물질로(Quencher) 수식한 Taqman Probe를 PCR 반응액에 첨가한 반응이다.-Extension 반응 시에 Taq DNA polymerase가 갖는 5'->3' Exonulease 활성으로 template에 hybridze한 taqman probe가분리되어 형광색소가 probe에 .. 2024. 6. 29. E.coli prep 및 일반 PCR 실험 - DNA prep method1) 1.5 mL tube에 Labeling2) 1.5 mL tube에 Proteinase K ....20uL 첨가, E.coli 200uL첨가, GB buffer 200uL 첨가3) vortexing 후, spin down, incubation 60도 10min4) Incubationg 60 °C, 10min5) 99% EtOH 400 uL 첨가 후 pipetting6) Binding column을 collection Tube에 장착 후 820 uL용액 전체를 옮김7) Centrifuge 8000rpm, 1min8) 내려간 Solution 제거, Binding Column을 Collection Tube에 다시 장착9) WA1 500 uL 첨가10) Centrifuge 8.. 2024. 5. 1. real-time PCR primer 디자인 (2) 저번 글에 이어서 이번에는 다른 바이러스를 가지고한번 더 디자인을 해보려고 한다.2024.03.17 - [분자생물학] - PCR primer design하기 PCR primer design하기PCR을 배우게 되면 가장 먼저 하는게 내가 원하는 바이러스에 대한 primer를 디자인하는 것이다. 손으로 직접 하는 방법도 있지만 프로그램을 이용하면 훨씬 간단하게 알아낼 수 있다. 오늘은 그gardening-my-life.tistory.com자세한 설명과 구체적인 방법은 위에 글 참고이번에 선택한 바이러스는 " Simian virus 40"이다.NCBI에 Simian virus 40 complete genome 검색해서NCBI reference number 확인하고 ( NC_001669.1)CDS를 확인해주려고.. 2024. 3. 20. PCR primer design하기 PCR을 배우게 되면 가장 먼저 하는게 내가 원하는 바이러스에 대한 primer를 디자인하는 것이다. 손으로 직접 하는 방법도 있지만 프로그램을 이용하면훨씬 간단하게 알아낼 수 있다. 오늘은 그 방법을 소개하고자 한다.1.먼저, target 바이러스를 NCBI에 들어가서 검색해준다.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ National Center for Biotechnology Information www.ncbi.nlm.nih.gov검색창에 내가 원하는 바이러스 이름+complete genome으로 검색해준다. EX)예를 들어 porcine parvovirus 바이러스에 대해 pcr을 하자그러면 검색에 porcine parvovirus complete genome을 검색한다.이런 화면.. 2024. 3. 17. Cloning (1)-전체 과정 -방법 A. EGFR의 mRNA를 cDNA로 역전사 효소를 이용하여 역전사 시킨다. (RNA가 변성이 잘되기 때문에 비교적 안정한 DNA를 사용한다.) B. 역전사 시킨 cDNA를 증폭하기 위해 PCR을 진행한다. B-1) DNA이중가닥을 풀기 위해 95도의 열을 가해 변성시킨다. B-2) 약간 냉각시킨 후 45-60도에서 프라이머를 부착한다. B-3) 72도에서 Taq중합효소가 주형가닥에 상보적인 서열로 확장하고 DNA를 형성한다. C. 전기영동을 통해 PCR이 잘 되었나 확인한다. D. 제한효소를 이용해 vector에 증폭한 DNA를 넣어준다. D-1) 단백질들은 우리가 원하는 제한효소를 갖고 있지 않아서 프라이머 양끝에 제한효소 인식 부위를 넣어주고 PCR 처리한다. 따라서 양 끝에 제한효소 처리가.. 2023. 12. 17. 이전 1 다음
